甘油冻存保存菌种的实验方法。
甘油菌的冻存
- 取处于对数生长期的细菌菌液进行保存菌种。
- 在无菌操作条件下，向已灭菌的1.5mL无菌EP管中，加入600uL菌液和200uL 80%甘油溶液（在细菌台中有配置好的母液，在小的玻璃丝口瓶中），轻轻混匀，务必充分混匀;
- 甘油冻存菌可以直接保存在-80℃中，有时为了减少菌体因冰晶形成而死亡，也会使用液氮速冻之后在放到-80℃冰箱保存。该冻存菌可在此条件下保存数年之久。随后的冻存和融化操作将会减少保存年限。
注意：与菌液接触的物品，如枪头、冻存管、80%甘油溶液均需要处于无菌状态，并保证操作在无菌条件下进行。
甘油菌的复苏
- 从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中刮取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。
- 在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
注意：所有东西准备完全后，再去-80℃冰箱取出保种菌，划线动作要快，时间拖得太长会融化冻存菌，而这导致保种菌死亡。